超氧化物歧化酶活力测定PPT
超氧水杨酸（superoxide anion radical，O2-）是生物体内氧自由基的一种，它具有极强的氧化能力，可以对细胞产生损伤作用。超氧水杨酸是...
超氧水杨酸（superoxide anion radical，O2-）是生物体内氧自由基的一种，它具有极强的氧化能力，可以对细胞产生损伤作用。超氧水杨酸是由超氧水杨酸酶（superoxide anion radical scavenging enzyme，superoxide dismutase，SOD）催化歧化反应而生成。因此，测定超氧水杨酸酶的活力可以间接反映生物体内超氧水杨酸的水平。超氧水杨酸酶的活力测定通常采用比色法或荧光法。其中，比色法是最常用的方法之一。下面将介绍比色法测定超氧水杨酸酶活力的基本原理和实验步骤。 基本原理超氧水杨酸酶可以催化超氧水杨酸歧化成水和氧气。在测定超氧水杨酸酶活力时，通常使用NBT（nitroblue tetrazolium）作为超氧水杨酸的电子受体。NBT在超氧水杨酸的作用下会被还原成蓝色的formazan，其生成量与超氧水杨酸的浓度呈正比。因此，通过测定formazan的生成量可以间接反映超氧水杨酸的浓度，从而计算出超氧水杨酸酶的活力。 实验步骤2.1 试剂准备NBT溶液将NBT溶于磷酸缓冲液（pH 7.4）中，浓度为1 mg/mL超氧水杨酸溶液将超氧水杨酸溶于磷酸缓冲液（pH 7.4）中，浓度为100 μmol/L蛋白酶溶液将一定量的待测蛋白质溶于磷酸缓冲液（pH 7.4）中2.2 操作步骤在96孔酶标板中加入20 μL的NBT溶液加入50 μL的待测蛋白质溶液加入50 μL的超氧水杨酸溶液将酶标板放入酶标仪中在560 nm波长下读取吸光度值在相同条件下设置空白对照孔加入50 μL的磷酸缓冲液（pH 7.4）代替超氧水杨酸溶液将酶标板放入酶标仪中在560 nm波长下读取吸光度值根据实验组和空白对照组的吸光度值计算超氧水杨酸酶的活力 结果计算根据以下公式计算超氧水杨酸酶的活力：活力 = (实验组吸光度值 - 空白对照组吸光度值) / (蛋白浓度 × 时间 × V)其中，蛋白浓度为待测蛋白质溶液的浓度（mg/mL）；时间为反应时间（min）；V为反应体系的总体积（mL）。需要注意的是，超氧水杨酸酶的活力单位为U/mg蛋白，其中1 U表示在1 min内催化1 μmol超氧水杨酸歧化成水和氧气所需的酶量。因此，在计算结果时需要将单位换算成U/mg蛋白。
